多能干细胞专用冻存液

一、产品信息

本产品为一款无血清、无动物源成分的专用冷冻保护液，含10%二甲基亚砜（DMSO）。产品专为多能干细胞设计，适用于-70℃至-196℃低温环境下的细胞冷冻保藏，可有效保障细胞在冷冻、长期储存及解冻复苏全过程中的活性与多能性，为干细胞研究与应用提供稳定保障。

二、产品组分及存储条件

三、产品特点

即开即用：无需额外配制，直接用于细胞冻存操作，节省实验时间

安全洁净：无血清、无动物源成分，降低外源污染风险

成分明确：不含抗生素、激素及生长因子，避免对细胞特性产生干扰

质量可控：无菌处理，超低内毒素水平，保障细胞培养安全性

四、使用说明

（一）细胞冻存操作步骤

细胞准备：当多能干细胞汇合度达到85%左右时，为最佳冻存时机。常规六孔板培养的细胞，每孔可收集2-4×10⁶个活细胞，建议分装为1-2支冻存管。

冻存管准备：根据细胞量准备足量1.5mL或2mL无菌冻存管，清晰标记细胞名称、代次（标注为P#，如P3）、冻存日期及操作人信息，避免混淆。

细胞收集：按照常规干细胞消化流程操作，将细胞制备成单细胞悬液或小细胞团块。

细胞处理与分装：将细胞悬液置于离心机中，300g离心3分钟，吸弃上清液。根据细胞总数，按“1mL冻存液对应1-10×10⁶个细胞”的密度，向细胞沉淀中加入预冷至2-8℃的本产品，用移液器轻柔吹打5-8次使细胞均匀重悬，避免剧烈吹打损伤细胞。随后将细胞悬液分装至已标记的冻存管中，每管分装量建议为1mL。

梯度降温保存：将装有细胞的冻存管放入梯度程序降温盒中，置于-80℃冰箱中过夜（12-16小时）；次日需及时将冻存管转入液氮罐（-196℃）中进行长期保存。若使用程控降温设备，可按干细胞专用降温程序降至-80℃以下后，直接转入液氮储存。

（二）细胞复苏操作步骤

前期准备：提前启动37℃恒温水浴锅（或细胞复苏仪），将多能干细胞专用培养基置于室温下预热；同时将Matrigel或VTN包被后的六孔板放入生物安全柜中，恢复至15-30℃室温状态。

复苏培养基配制：取5mL多能干细胞培养基，加入Rocki（Rho激酶抑制剂）至终浓度为10μM，混匀后置于室温备用。

快速解冻：从液氮罐中取出1支冻存细胞，立即用镊子夹住冻存管底部，放入37℃恒温水浴锅中轻轻摇晃。为防止冻存管因温度骤升炸开，需将冻存管管盖朝向身体反方向。全程控制在1分钟内完成解冻，待肉眼观察到管内冰晶即将完全溶解（仅残留微小冰晶）时，立即取出冻存管。

细胞清洗：用蘸有75%酒精的无尘纸彻底擦拭冻存管表面进行消毒，随后移入生物安全柜内。将管内细胞悬液缓慢转移至事先准备好的15mL离心管中，用移液管吸取5mL DMEM/F12培养基，沿离心管壁逐滴加入细胞悬液中，边加边轻柔晃动离心管混匀，避免细胞聚沉。将离心管放入离心机，200g离心3分钟。

细胞重悬与接种：离心结束后，小心吸弃上清液，向细胞沉淀中加入1mL提前配制好的复苏培养基，用移液器轻轻吹打2-3次使细胞重悬（尽量减少吹打次数，保护细胞活性）。吸弃六孔板中多余的Matrigel/VTN包被液，先向2个孔中各加入1.5mL复苏液。将1支冻存管复苏的细胞平均接种至这2个孔中，水平方向十字交叉摇匀3次，确保细胞均匀分布。

培养与换液：将接种好细胞的六孔板放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中，放入后再次水平十字摇匀3次。培养18-24小时后，更换为新鲜的多能干细胞培养基（不含Rocki），后续按常规干细胞培养流程进行换液与观察。

五、注意事项

六、 订购信息

*将基础培养基和添加物混合均匀配置成完全培养基，可在2℃-8℃中存储，4周内用完。